核酸染料要怎么用?用的時(shí)候要注意些什么?
點(diǎn)擊次數:11353 更新時(shí)間:2020-12-15
核酸染料的機理是通過(guò)靜電吸附與DNA分子結合,從而大大增加了DNA的發(fā)光。它的熒光信號強,背景低,不同于強效EB,毒性較低,使用更安全。雙鏈DNA在透射的紫外線(xiàn)下顯示綠色熒光,可用于RNA染色。激發(fā)波長(cháng)分別為268m,294mm和491nm,前兩種是紫外光,后者是可見(jiàn)光。發(fā)射波長(cháng)在530nm處產(chǎn)生。

核酸染料的使用方法:
1、在微波爐中融化100m瓊脂凝膠溶液(濃度通常為0.8%?2)。
2、加入2-5ul,并輕輕搖動(dòng)以免產(chǎn)生氣泡。
3、冷卻至不燙手時(shí)倒入凝膠,瓊脂糖凝膠*固化后,加載樣品進(jìn)行電泳。
4、電泳完成后,使用可疑的凝膠成像系統或可見(jiàn)光透射儀進(jìn)行觀(guān)察。如果您使用可疑的凝膠成像系統拍照,則可以通過(guò)調節照明設備,曝光時(shí)間并選擇合適的光片來(lái)獲得清晰的圖像和低背景的照片。
核酸染料的注意事項:
1、膠水的厚度不應超過(guò)0.5cm,膠水太厚會(huì )影響檢測的靈敏度。
2、瓊脂凝膠的反復融化可能會(huì )影響核酸檢測的靈敏度。
3、當通過(guò)凝膠電泳回收DNA時(shí),建議在自然光下進(jìn)行染色和切割DNA譜帶,以避免紫外線(xiàn)和EB對目標DNA的損害,這可以顯著(zhù)改善分子生物學(xué)的下游水平,例如作為克隆,轉化和轉錄。
4、對皮膚和眼睛有一定刺激性。操作時(shí)請戴手套。如果不小心觸摸皮膚,則應立即清洗并正確處理廢物。